Комбинация методов TIRF + AFM от JPK проливает свет на важнейшие геномные процессы

Сочетание методов флюоресценции полного внутреннего отражения и атомно-силовой микроскопии JPK позволило точно определить положение белка RAD54 в процессе гомологичной рекомбинации.

Humberto Sanchez  вместе с коллегами  из Нидерландов исследовал влияние взаимодействия нескольких белковых компонент с ДНК на важнейшие геномные процессы. Ученые продемонстрировали совместное использование флюоресценции полного внутреннего отражения (TIRF) и сканирующей зондовой микроскопии для определения точного положения флюоресцентного меченного белка RAD54, взаимодействующего с нуклеопротеиновыми филаментами пресинаптической (оц ДНК) и постсинаптической (дц ДНК) рекомбиназы RAD51. На АСМ-изображениях высокого разрешения на флюоресцентном микроскопе, ученые обнаружили, как и ожидали, некоторые из белков RAD54 на концах филаментов RAD51. Чаще всего белки RAD54 наблюдались вдоль комплексов RAD54-ДНК. Ученые показали, что различная конфигурация белка RAD54 может играть как стабилизирующую так и дестабилизирующую роль для комплексов RAD51-ДНК и этим отображать различные роли белка в гомологичной рекомбинации.

TIRF-AFM  микроскопия с целью определения положения белка RAD54 на филаментах комплекса RAD51-ДНК. Комплекс, нанесенный на прозрачный и плоский субстрат из слюды и стекла. Конечное изображение получено наложением TIRF и АСМ.  Три красных пятна означают соответственно  комплекс, ассоциированный посредством RAD54; комплекс и RAD54 и перемежающиеся комплекс с RAD54. Биотинилированный RAD54 на сверхскрученнной дц ДНК. Наложение TIRF и AFM подчеркивает наличие RAD54 (красный сигнал) в белковом комлексе после окрашивания AF633-стрептавидином. 500 нм. Humberto Sunchez et al, PNAS,  110, 28, 11385-11390, Нидерланды Полный текст статьи доступен по ссылке http://www.pnas.org/content/110/28/11385.full